Laborrichtlinien für den Nachweis einer Monkeypox-Virusinfektion
Der Generaldirektor der Weltgesundheitsorganisation (WHO) erklärte den eskalierenden globalen Affenpockenausbruch am 23. Juli 2022 zu einem öffentlichen Gesundheitsnotstand von internationaler Bedeutung (PHEIC). Laut WHO gibt es mehr als 35.000 Fälle in 92 Ländern/Territorien und 12 Todesfälle am 17. August. Die meisten gemeldeten Fälle (mit Reisehistorie) reisten in Gebiete in Europa und Nordamerika.
Affenpocken sind eine seltene Krankheit, die durch eine Infektion mit dem Affenpockenvirus (MPXV) verursacht wird – einem umhüllten doppelsträngigen DNA-Virus, das zur gleichen Familie von Viren gehört, die Pocken verursachen. Dieses Virus kann durch Kontakt mit Körperflüssigkeiten, Läsionen auf der Haut oder inneren Schleimhautoberflächen mit Symptomen wie Fieber, Kopf- und Muskelschmerzen übertragen werden. Die Inkubationszeit von Affenpocken beträgt normalerweise 6 bis 13 Tage, kann aber zwischen 5 und 21 Tagen (etwa drei Wochen) liegen.
Laut WHO stammen die besten diagnostischen Proben direkt aus dem Hautausschlag – Haut, Flüssigkeit oder Krusten oder Biopsie, sofern möglich. Andere Methoden wie Antigen- und Antikörpernachweis sind möglicherweise nicht sinnvoll, da sie nicht zwischen Orthopoxviren unterscheiden.
Bei der Manipulation der Proben von vermuteten, wahrscheinlichen oder bestätigten Fällen von Affenpocken im Labor wird ein risikobasierter Ansatz empfohlen. Daher müssen die Verfahren zum Nachweis des MPXV, das als Erreger der Risikogruppe 3 eingestuft ist, in einem Labor der Biosicherheitsstufe 2 unter Verwendung der unten aufgeführten Ausrüstungsliste durchgeführt werden.
Gerätehandbuch für den Affenpockenvirus-Nachweis
Lagerung von Proben und Reagenzien
Die MPXV-Proben werden zur Kühlung bei 2 °C bis 8 °C empfohlen oder müssen innerhalb einer Stunde nach der Entnahme eingefroren werden (-20 °C oder niedriger). Wenn die Transportzeit sieben Tage überschreitet, sollten die Proben bei -20 °C oder darunter gelagert werden. In der Zwischenzeit werden -70 °C für die Langzeitlagerung von Proben empfohlen (>60 Tage ab Abholung).
Laborkühlschränke, Laborgefrierschränke und Ultratiefkühlschränke von Biobase sind mit gut konzipierten Kühlsystemen und hochwertigen Materialien ausgestattet, die für die Lagerung temperaturempfindlicher biologischer Proben geeignet sind, die kritische Lagerbedingungen erfordern.
Probenhandhabung und -vorbereitung
MPXV kann während der Probenverarbeitungsphase aufgrund von kontaminiertem Material oder unsachgemäßen Methoden übertragen werden. Dadurch sind erhöhte Biosicherheitsmaßnahmen zu beachten. Vor der Probeninaktivierung müssen Proben von Patienten mit Verdacht auf MPXV in einer funktionsfähigen Biosicherheitswerkbank der Klasse II vorbereitet werden; Für ordnungsgemäß inaktivierte Proben ist dies jedoch nicht erforderlich.
Abgesehen von dem Schutz, den die Biosicherheitswerkbänke bieten, sind die Biobase-Sicherheitswerkbänke der Klasse II NSF 49 und EN 12469 konform mit benutzerfreundlichen Funktionen und sind für verbesserte Sicherheit auf allen äußeren und inneren lackierten Oberflächen mit antimikrobiellem Pulver beschichtet. Zentrifugen sind für die Trennung der flüssigen und festen Bestandteile der Probe erforderlich. Sicherheitsbecher oder versiegelte Rotoren werden empfohlen, wenn dies für das Verfahren unbedingt erforderlich ist.
Erkennung und Analyse
Nukleinsäureamplifikationstests (NAAT) werden durchgeführt, um die MPXV-Infektion zu bestätigen. Um einzigartige virale DNA-Sequenzen nachzuweisen, wird entweder Echtzeit-PCR oder herkömmliche Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet. Die Virenerkennung umfasst zwei Schritte. Die erste PCR erkennt Orthopoxviren, identifiziert aber nicht die Spezies, während die zweite PCR (oder Sequenzierung) spezifisch MPXV erkennt.
Ein Echtzeit-PCR-Thermocycler bietet eine effiziente Amplifikation von Nukleinsäuren für die Virusanalyse. Biobase bietet die neuen Swift™ PCR-Thermocycler mit einem eingebauten Computer für den eigenständigen Betrieb von der Eingabe, Überwachung und Analyse des PCR-Programms an.